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测定蛋白质的构型和功能要用什么仪器,有哪些步骤!

发布日期: 2022-12-02
浏览人气: 277
   构型这个概念是指一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。蛋白质的构型就是一级结构,指其氨基酸排列顺序。
  测定蛋白质的构型的主要有两种方法:Edman降解(Edman degradation)和质谱法。
  EDMAN降解法测序是经典的方法,通过从多肽链游离的N末端(或者C末端,但是很少)测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,现在一般都是自动测序仪。
  质谱法测蛋白只要是利用生物质谱仪,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特异的酶将蛋白切成肽段,然后通过质谱方法进行测定,产生数据或通过重头比对,或者通过生物信息学中数据库搜索的方法推断出肽段序列,然后再由肽段序列拼接处蛋白序列。这种方法是近些年来随着蛋白质组学的发展而广泛被使用,但是对于蛋白完整序列测定需要较强的生物信息学技术。
  整体而言,EDMAN降解法准确,但是耗时长,而且对于所测定的肽段要求很高,不能太长,不能太难修饰等等,一般能测个20-50碱基不错了。而质谱法方法快速,但是准确性比EDMAN降解法略差。
  另外,楼主讲的蛋白功能测定,不同的蛋白质功能各异,蛋白功能主要通过生物学实验反复验证次得到,这个比较复杂,没有固定的模式,要逐一研究。
  另外,像核磁仪可以用来研究蛋白的构象或者说晶体结构,表面等离子共振仪器可以用来研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白质是未来有限的生物研究资源,现在对蛋白质的研究热情都很高。也有许多相关的基础科教书,楼主感兴趣可以去看看。
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